M1逾期计算(m1m2逾期是什么意思)

目的掌握福林酚法测定蛋白质含量的原理和方法，熟悉分光光度计的操作。
二。原理福林酚法测定蛋白质含量的过程包括两步:第一步是蛋白质在碱性条件下与cu 2反应生成络合物，第二步是络合物还原福林试剂(磷钼酸和磷钨酸试剂)生成深蓝色化合物，颜色深浅与蛋白质含量成正比。
该方法的灵敏度比双缩脲法高100倍。
硫酸铵、甘氨酸、还原剂如二硫苏糖醇(dtt)、巯基乙醇等。会干扰反应。
三。仪器和试剂。仪器(1)分光光度计(2)水浴(3)试管(4) 8个带塞子的试管(5) 2个小烧杯(6)漏斗和架(7)分析天平(8)吸管:0.5m1x1、1m1x2、5mx1 (9)容量瓶:100m1 x 2、10ml x1(10)滤纸、玻璃棒等。(11)砂浆(12)离心机，离心管2。试剂(1) 0.5mol/ l naoh (2)试剂A 1)称取1og na2c03、2g naoh和0.25g酒石酸钾钠。
2) 0。溶解5g硫酸铜(cus04 5h2o)，然后用蒸馏水调节体积至100m1。
每次使用前，将50份溶液A与1份溶液B混合，即试剂A.
这种混合物的有效期只有1天，过期即失效。
(3)试剂B:将100g钨酸钠(na 2 wo 4 . 2h 2 o)、25g钼酸钠(na 2 mo 4 . 2h 2 o)和700 ml蒸馏水加入1.5l磨口回流装置中，然后加入50 ml 85%磷酸和100 ml浓盐酸，充分混合，连接回流冷凝器。小火回流10小时。回流后，加入150克硫酸锂、50毫升蒸馏水和几滴液溴，继续煮沸15分钟。冷却后，溶液变黄(如仍为绿色，反复加入几滴液溴，继续煮沸15min)。
然后稀释至1l，过滤，将滤液置于棕色试剂瓶中保存。
使用时，加入约1倍的水，使最终浓度等于1mol/L盐酸。
3。材料绿豆芽或其他植物材料。
四。操作步骤1。绘制标准曲线(1)制备标准牛血清白蛋白溶液:在分析天平上准确称取0.025g结晶牛血清白蛋白，倒入小烧杯中，加入少量蒸馏水使其溶解，然后转移至100m1容量瓶中。用少量蒸馏水冲洗烧杯中的残渣数次，将冲洗液一起倒入容量瓶中，最后用蒸馏水定容至刻度，制成标准的鸡蛋自身质量溶液。
(2)牛血清白蛋白系列标准溶液的制备:取6支带塞试管，按下表加入牛血清白蛋白标准溶液和蒸馏水。
然后每管加入5ml试剂A，混匀，室温放置10min，再加入0.5ml试剂B，立即混匀(此步要快，否则显色会减弱)。
30min后，不含蛋白的1号试管作为对照，其余5个试管中的溶液依次用分光光度计在波长5oonm处显色。
记录每个试管中溶液的吸光度。
试剂1 2 3 4 5 6 250ug/mg牛血清白蛋白(ml)0 0.20 0.4 0.6 0.8 1.0 H2O(ml)1 0.8 0.6 0.20蛋白质含量(ug) 0 50 100 150 200 250 (3)标准曲线的绘制:以吸光度为竖标，牛血清自身蛋白，
2。样品测定(1)在研钵中称取1g绿豆芽下胚轴，加入2ml蒸馏水，匀浆。
转移到离心管中，用6m1蒸馏水洗涤研钵，并合并到离心管中。
以4000转/分钟的速度离心20min。弃去沉淀物，将上清液转移至容量瓶中，并定容至10m1。(2)取两个带塞子的试管，每管加入1ml上清液，分别加入5ml试剂A，混匀，然后放置lomin，再加入0.5 ml试剂B，快速混匀，室温放置30min，在500nm波长下比色。【/br/】五、结果处理:从标准曲线中查出试液中蛋白质的含量x (ug)，然后计算出样品中蛋白质的百分含量。六。注意事项福林试剂(试剂B)在碱性条件下不稳定，但在本实验中，反应发生在ph 10，因此福林试剂反应时应立即混合，否则显色会减弱。

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